转自:东富龙
东富龙培养基研发团队最新成果,推出基于原HEK293培养基系列优化开发获得HEK293 Pro系列产品,提供更具优势的HEK293系统Lentivirus, adenovirus and adeno-associated virus研发生产解决方案,进一步提升表达产量,并可同东富龙原HEK293培养基系列直接替换,无需进一步适应驯化,更快捷提升表达效率。
东富龙HEK293 Pro应用蛋白ADV及AAV参考工艺
为了充分发挥HEK293 Pro培养基产品的产品性能,获得更具优势的表达效率,东富龙生物试剂技术支持应用团队提供以下参考工艺过程:
01
HEK293在HEK293 Pro系列培养基中进行适应性培养,当VIA>95%且PDT<36h,则适应成功。可根据需要进行保种建库。
02
继续传代3次,即可开始进行转染及表达生产。
2.1 按0.5E6将HEK293接种至HEK293 Pro系列培养基中进行培养。
2.2培养2~3天,预计细胞密度达到2~4E6/mL取样进行细胞数及活性检测,1:1添加预热后的新鲜HEK293 Pro系列培养基,继续培养。
2.3每天取样检测细胞数及活性。
2.4活细胞密度达到3~5×106cells/mL进行转染,建议PEI : DNA(1~1.5mg/mL)为3:1。
03
转染后24h和96h,推荐添加4mM Gln和Tobitec FD,每次补料添加量占培养体积5%。
04
继续培养至收获。
应用案例展示
CCM组合
GROUP 1: HEK293 CDM26+基础补料
GROUP2: HEK293 CDM26Pro+Tobitec FD
细胞系:HEK293F
工艺:流加
产品类型:蛋白
HEK293 CDM26Pro+Tobitec FD 可以显著提高蛋白表达量30%左右,HEK293 Pro系列配套Tobitec FD在此工艺下对ADV及AAV及LV表达量的提升更具优势。
东富龙生物试剂
上海东富龙生物试剂有限公司是东富龙科技集团的全资子公司,自创立以来,依托东富龙系统化平台、全球优质客户资源及专业技术支持服务能力,立足国产化自主研发与开放合作,建立集关键试剂研发创新、应用转化、生产销售为一体的综合型试剂平台,提供商品化培养基的规模化生产供应、个性化培养基的定制开发、规模化生产工艺技术支持。
在生物大分子药(抗体/蛋白/疫苗)领域,为生物技术研发生产提供培养基系列相关产品。在细胞与基因治疗领域,在细胞与基因治疗技术(CAR-T/TCR-T/NK等免疫细胞与干细胞治疗技术等),提供培养用无血清培养基、诱导刺激用细胞因子、冻存用保存液等关键试剂整体解决方案。
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